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游离脂肪酸（Non-esterifiedfattyacids，NEFA）和辅酶A在乙酰辅酶A合成酶(ACS)的作用下反应生成乙酰辅酶A。乙酰辅酶A在乙酰辅酶A氧化酶（ACOD）的作用下生成H2O2，然后通过色原在过氧化物酶（POD）的作用下生成有色底物。